01

原位雜交（in situ hybridization）是指將特定標(biāo)記的已知核酸序列作為探針，與細(xì)胞或組織切片中核酸進(jìn)行雜交，從而對特定核酸序列進(jìn)行精確定量定位的過程。

原位雜交可以在細(xì)胞標(biāo)本或組織標(biāo)本上進(jìn)行。

在原位雜交實(shí)驗(yàn)中，探針核酸如若與細(xì)胞或組織切片中核酸進(jìn)行結(jié)合，需要精準(zhǔn)的控制溫度的變化。

02

1、制備探針：原位雜交的第一步是制備探針。探針是一段DNA序列，可以與目標(biāo)DNA序列互補(bǔ)配對；

2、制備樣品：樣品可以是細(xì)胞、組織或染色體；

3、雜交：探針與樣品中的目標(biāo)DNA序列互補(bǔ)配對。雜交可以在液相中進(jìn)行，也可以在固相中進(jìn)行。液相雜交需要在高溫下進(jìn)行，以便探針可以與目標(biāo)DNA序列雜交。固相雜交需要在低溫下進(jìn)行，以便探針可以與目標(biāo)DNA序列雜交；

4、洗滌：需要將未雜交的探針從樣品中洗掉，以便檢測；

5、檢測：需要檢測探針是否與目標(biāo)DNA序列雜交。

03

1、細(xì)胞特異性mRNA轉(zhuǎn)錄的定位，可用于基因圖譜，基因表達(dá)和基因組進(jìn)化的研究；

2、感染組織中病毒DNA/RNA的檢測和定位，如EB病毒mRNA、人類乳頭狀瘤病毒和巨細(xì)胞病毒DNA的檢測；

3、癌基因、抑癌基因及各種功能基因在轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)及其變化的檢測；

4、基因在染色體上的定位；

5、檢測染色體的變化，如染色體數(shù)量異常和染色體易位等；

6、分裂間期細(xì)胞遺傳學(xué)的研究，如遺傳病的產(chǎn)前診斷和某些遺傳病基因攜帶者的確定，某些腫瘤的診斷和生物學(xué)劑量測定等。

04

為了提高原位雜交的成功率可以采取以下措施：

1、 挑取優(yōu)勢菌落、選取新鮮的組織或者長勢好的細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)材料 的選用是直接影響原位雜交受否成功的關(guān)鍵；

2、 無菌操作。在生物安全柜或通風(fēng)櫥中進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作，避免空氣中或其他雜菌的污染，提高原位雜交成功率；

3、 使用適當(dāng)?shù)膬x器和設(shè)備進(jìn)行精準(zhǔn)控溫。在實(shí)驗(yàn)過程中，需要37℃培養(yǎng)以及4℃長期貯放，也需要低豐度標(biāo)記核酸的特異性擴(kuò)增，直至獲得雜交反應(yīng)的結(jié)果；

4、 抗生素的適配性。避免非特定標(biāo)記核酸的雜交，減少原位雜交實(shí)驗(yàn)中的誤差；

5、 硝酸纖維素膜使用質(zhì)量好的。具有高蛋白結(jié)合能力和高機(jī)械強(qiáng)度、毛細(xì)管率與厚度一致、使用中不需要甲醇預(yù)濕等性能，獲得高特異性的抗體，增加原位雜交成功率。

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